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細胞培養基中的渾濁,究竟是何物?


發布日期:[2019-12-17] 共閱[246]次

    養娃要悉心照料,同樣養細胞也需要無微不至的關懷,各種吃的穿的用的,更是一樣都不能少,為了這些“可愛”的細胞們,不知道有多少生物醫學科研人操碎了心。

    這不,zui近養的好好的細胞,這狀態說差就差了,還不是細胞污染的原因,這究竟是什么情況?

    細胞培養基中的渾濁,究竟是什么?

    如果排除了污染,細胞培養基中的渾濁通常被解釋為金屬、蛋白和其他培養基組分的沉淀。沉淀物可能損害細胞健康,因為它們通過螯合可移除養分和其他需要的組分,從而改變培養基的組成。沉淀物也是顯微鏡可見的,可能會干擾依賴成像的實驗分析。

    產生沉淀的可能原因

    一、溫度變化

    在細胞培養中,溫度是引起沉淀的主要因素之一。當遭遇溫度的極端變化時,高分子量血漿蛋白會從溶液中析出;熱失活和凍融循環能促進蛋白降解和沉淀;因為液體或重組成培養基在使用之間保持冷藏儲存,鹽可能沉淀,尤其是10x或其他濃縮的儲存液。

    二、失水誘導的濃度改變

    如果培養基可能蒸發,培養基組分(包括鹽) 的濃度將會增加,特別是培養基表面可能容易形成晶體沉淀。

    三、鈣鹽

    制備無血清培養基時,組分添加的順序可能導致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉淀,比如CaCl2和MgSO4在溶液中反應產生CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩定會加劇這一問題。

    四、金屬補充物

    銅、鐵和鋅等金屬離子是細胞生長所必需的,是無血清培養基的重要補充物。培養系統中其他血清組分的缺失可能導致這些金屬沉淀,為細胞形成有毒的環境。在較高pH環境下(一般>8時),碳酸鹽和氫氧根離子與銅離子、磷酸鹽和氫氧根離子與鐵離子、碳酸鹽、磷酸鹽和氫氧根離子與鋅離子、氫氧根離子與鎂離子易形成不溶性沉淀物;在氧化條件下,銅和鋅更易于沉淀。

金屬沉淀物及對應顏色:

硫化亞銅(I):黑色

氧化銅(I):黑色

氧化亞鐵(I):黑色

硫化亞鐵(II):黑色

氫氧化銅(II):藍色

磷酸亞鐵(II):藍色

胱氨酸亞銅:藍-灰色

碳酸銅(II):藍-深綠色

氯氧化銅(II):藍-綠色

醋酸鐵(III):棕色

碳酸鈣:無色

氫氧化鋅:無色

磷化亞銅(I):灰-黑色

氧化鎂:灰-綠色或棕-黑色

三氧化二鐵(III):紅-黑色

氫氧化鐵(III):紅-棕色

碳酸錳:玫瑰色

磷酸鋅:灰色

磷酸鈣:白色

磷酸鎂:白色

氫氧化鎂:白色

過氧化鎂:白色

焦磷酸鎂:白色

碳酸鋅:白色

氧化鋅:白色

硫化鋅:白色

碳酸亞銅(I):黃色

氫氧化亞銅(I):黃色

過氧化鋅:黃色

    五、污染

    培養物渾濁可能是細菌或真菌污染造成的。

    細胞培養沉淀的常見原因和解決方案

 

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